Selenitový bujón je obohacovacie médium so selektívnymi vlastnosťami, určené na izoláciu patogénnych baktérií rodu Salmonella (lat. Salmonella). Je veľmi účinné, ak je potrebné tento konkrétny patogén odhaliť medzi ostatnými zástupcami črevnej mikroflóry. Médium sa používa na klinickú diagnostiku a sanitárne účely pri testovaní potravín.
Všeobecné charakteristiky
Selenitový bujón sa pripravuje na báze prášku, ktorý je homogenizovanou zmesou rôznych zložiek kompozície. Farba suchého materiálu môže byť svetložltá alebo krémová, v závislosti od typu média. Prášok má vlastnosti voľnej tekutosti.
Hotový seleničitanový bujón je tekuté priehľadné médium svetložltej farby. Táto hmota sa naleje do nádob, kde sa siatie vykonáva na ďalšiu inkubáciu.
Existujú tri hlavné typy seleničitanového vývaru:
- čisté médium - vhodné na izoláciu Salmonella z klinického aj sanitárneho materiálu;
- s prídavkom manitolu (dvojzložkový bujón) – určený len na prácu s klinickým materiálom;
- cysteín-seleničitanové médium – možno použiť na izoláciu salmonely z biomateriálu patologického pacienta (výkaly, moč atď.).
Tieto typy sa mierne líšia v kompozícii a akčných vlastnostiach.
Hlavnou úlohou seleničitanového bujónu je podporovať hromadenie salmonely, inhibovať rast sprievodnej mikroflóry. To umožňuje nielen odhaliť patogén v materiáli, ale aj následne preniesť na agar. Médium bolo vyvinuté Leiflerom, ktorý ako prvý objavil selektívny účinok seleničitanu proti Salmonella.
Zloženie
Selenitový vývar obsahuje:
- hydrolyzát kazeínu;
- laktóza;
- fosforečnan sodný;
- hydroseleničitan sodný.
Selenit-cysteínové médium okrem týchto zložiek obsahuje L-cysteín a hydrogénfosforečnan sodný. Zloženie manitolového bujónu sa líši v tom, že namiesto kazeínového hydrolyzátu obsahuje peptický rozklad živočíšneho tkaniva. V takomto prostredí nie je laktóza, ale je tam manitol. Ten pôsobí ako fermentovateľný substrát a poskytuje tlmiace vlastnosti bujónu.
Všetky zložky prášku, okrem hydroseleničitanu sodného, sa podmienečne nazývajú časť A a selektívna látka sa nazýva časť B.
Princíp fungovania a vlastnosti prostredia
Selenitový vývar funguje ako pamäťové médiumso selektívnym pôsobením. Selektívny účinok je zabezpečený toxicitou seleničitanu, ktorý inhibuje rast väčšiny mikroorganizmov. Baktérie rodu Salmonella sú zároveň schopné túto zlúčeninu obnoviť, čím eliminujú toxický účinok na ich vlastné bunky. V dôsledku reakcie však vzniká zásada, ktorá znižuje škodlivý účinok seleničitanu na rast pridruženej mikroflóry, a preto je potrebné pH stabilizovať. Túto funkciu vykonávajú baktérie, ktoré fermentujú laktózu za tvorby kyseliny. Pufrovanie média zabezpečuje fosfát.
V dvojzložkovom bujóne je pH stabilizované manitolom. Cysteínové médium zlepšuje selektívny účinok proti Salmonella. Takýto vývar je účinný na kontrolu infekčného pozadia u pacientov v neakútnom štádiu ochorenia alebo u rekonvalescentov.
Prejav rastových charakteristík referenčných kmeňov v médiu možno pozorovať po 12-24 hodinách od začiatku inkubácie. V tomto prípade Salmonella tvorí bezfarebné kolónie.
Funkcie varenia
Príprava média prebieha v dvoch fázach. Najprv sa pripraví roztok so selektívnou zložkou v množstve 4 gramy seleničitanu sodného na liter destilovanej vody. Potom pridajte 19 gramov hlavného prášku (časť A). Roztok sa dôkladne premieša a zahrieva, kým sa častice úplne nerozpustia, potom sa naleje do sterilných skúmaviek.
Pri varení je dôležité dodržiavaťteplotný režim, pretože médium je nestabilné voči prehriatiu. Sterilizáciu vývaru je možné vykonať iba vo vodnom kúpeli alebo použiť prúd pary. Autoklávovanie média je prísne zakázané.
