Tento článok bude venovaný fenoménu precipitačnej reakcie. Tu zvážime vlastnosti formulácie tohto javu, fenomén difúzie, všeobecné charakteristiky, úlohu v ľudskom živote a oveľa viac.
Úvod do fenoménu
Precipitácia je fenomén sérologického typu, počas ktorého interagujú rozpustné antigény s protilátkami a v dôsledku toho sa pozoruje precipitácia - zrazenina.
Všeobecnou charakteristikou precipitačnej reakcie je forma koordinovaný vplyv antigénu a protilátky. Tieto typy interakcií umožňujú určiť prítomnosť neznámych antigénov v testovanej látke pridaním známych protilátok a antigénov. Proces zrážania bez prítomnosti solí bude prebiehať horšie a najlepšie optimum leží v rozmedzí pH 7,0-7,4.
Zložky reakcie
Medzi zložkami zrážacej reakcie sú tri hlavné prvky:
- Antigén s molekulárnou povahou. Je v dobrom stave, inými slovami, jerozpustný. Takýto antigén sa tiež nazýva precipitogén, čo je lyzát alebo tkanivový extrakt atď. Precipitogén má charakteristický rozdiel od aglutinogénu, ktorý spočíva vo veľkosti častíc, z ktorých pozostáva. Aglutinogén má vlastnú veľkosť bunky a precipitogény zodpovedajú veľkosti molekuly. Roztok antigénu sa vyznačuje priehľadnosťou.
- Protilátka nachádzajúca sa v ľudskom krvnom sére, ako aj v imunitnom diagnostickom sére, ktoré obsahuje študované protilátky.
- Elektrolyty sú roztoky chloridu sodného, ktoré sú izotonické.
Produkcia precipitogénov
Nastavenie precipitačnej reakcie nie je možné bez precipitogénu, ktorý sa získava rozomletím materiálov a extrakciou proteínových antigénov z nich. Extrakcia prebieha varom alebo inými metódami.
Zarážajúce sú lyzáty, ale aj tkanivové a orgánové extrakty, krvné séra, rôzne druhy filtrátov na báze mikrobiálnych bujónových kultúr, ale aj soľný extrakt mikroorganizmov a autolyzátové látky príklad precipitogénov.
Nastavenie počas zrážok
Teraz uvažujme o spôsobe nastavenia precipitačnej reakcie.
Prebieha prstencová zrážacia reakcia, ktorá prebieha v špeciálne pripravených skúmavkách. Sérum sa zavedie do dutiny riadu a naleje sa cez stenu pomocou výlevky pipety. Potom sa na vrch opatrne navrství príslušné množstvo precipitátora a potom sa skúmavka uvedie do zvislej polohy z vodorovnej polohy. Nastavenie a zohľadnenie zrážacej reakcie je veľmi starostlivá operácia. Výsledok sa zaznamená po objavení sa bieleho krúžku na hranici medzi antigénom a protilátkou. Ak si reagujúce prvky reakcie navzájom zodpovedajú, potom sa viažu, čo sa však prejaví až po dlhom čase ich interakcie.
Precipitačná reakcia prebieha aj v Petriho miske alebo na pohári sklíčko, na ktoré sa prenesie agarový gél a nanesie sa v malej vrstve. Po vytvrdnutí v géli sa vyreže malý počet jamiek, do ktorých sa umiestnia antigény a protilátky. Existujú dva spôsoby, ako vykonať túto akciu: metóda radiálnej imunodifúzie a dvojitej imunodifúzie.
Všeobecné informácie
Mechanika práce zrážok je podobná aglutinačnému zariadeniu. Antigén, ktorý už vstúpil do reakcie, pod vplyvom séra imunitného typu znižuje stupeň disperzity. Dôležitou podmienkou je transparentnosť séra aj antigénu.
Registráciu reakcie môžete zlepšiť, ak na protilátky navrstvíte antigény. V dôsledku toho je možné pozorovať výskyt zrazenín vo forme krúžku. Tento jav sa nazýva prstencové zrážanie a uskutočňuje sa v špeciálnych rúrach s priemerom 2,5 až 3,5 mm. Jedným z najbežnejších príkladov precipitačnej reakcie je diagnóza antraxu.
Precipitácia umožňuje určiť úroveň toxigenity difterickej kultúry v agare.
Počas uvažovanej reakciedochádza k precipitácii antigénnych komplexov a protilátok. Precipitácia je imunologický jav, ktorý umožňuje určiť množstvo protilátok v krvnom sére chorého alebo očkovaného človeka a zvierat.
Následok titrácie
Je dôležité vedieť, že údaje získané titráciou vyššie uvedenej metódy nie sú kvantifikovateľné. Na vytvorenie a analýzu kvantitatívneho hodnotenia obsiahnutého počtu protilátok vyvinuli M. Heidelberger a E. Kabat špeciálnu reakčnú techniku, ktorá je založená na hľadaní a identifikácii zóny ekvivalencie. Zmiešanie vekového počtu antigénov s konštantným objemom antiséra vedie k zvýšeniu pôvodne vytvoreného precipitátu a potom opäť k jeho zníženiu v dôsledku zvýšenia schopnosti rozpúšťať komplexy antigénov. Stanovením množstva protilátok v supernatantoch obsiahnutých v každej skúmavke môžete zistiť, že v určitom počte misiek s protilátkami bude chýbať tekutina. Tu sa v porovnaní s inými skúmavkami vytvorí najväčšia zrazenina. Vďaka tomu a odčítaniu precipitátu antigénneho proteínu od celkovej hodnoty proteínov je možné získať presnú hodnotu protilátok obsiahnutých v objeme konkrétneho študovaného séra. Ďalej sa množstvo proteínových molekúl zrazeniny určuje množstvom dusíka alebo pomocou kolorimetrických metód.
Hodnotenie hodnôt
Odhad hodnôt precipitácie v diagnostickej metodike by mal brať do úvahy možnosť prítomnosti protilátky, ktorá nemá vlastnosť precipitínu, v imunitnom sére, z čoho vyplýva, že samotná zrazenina nemusí byť vzniká po reakcii s antigénmi. Zoznam takýchto molekúl zahŕňa neúplné protilátky a niektoré druhy zo skupiny gama-A globulínov.
Precipitačná reakcia v laboratórnych podmienkach nachádza uplatnenie v rôznych typoch modifikácií. Napríklad termoprecipitačná reakcia sa používa na detekciu bakteriálnych antigénov botulizmu, antraxu atď., ktoré nepodliehajú tepelnej denaturácii. Na rozdiel od kruhovej precipitácie tento typ reakcie využíva filtráty predmetného materiálu vo varenom stave.
Analýza precipitačnej reakcie v komplexnej zmesi neumožňuje charakterizovať vlastnosti jednotlivých prvkov zmesi. V takýchto prípadoch sa človek uchýli k metóde zrážania v agare a tiež používa imunoelektroferézu.
Difúzne zrážky
V tejto oblasti výskumu existuje koncept difúznej precipitačnej reakcie (RPD). Je založená na schopnosti difundovať v géli protilátky a rozpustné antigény. Difúzia je schopnosť molekuly určitej látky prenikať do molekúl inej látky, čo je spôsobené tepelným pohybom.
Gél je systém dispergovaného typu, v ktorom je kvapalná fáza rozložená rovnomerne v pevnej fáze. Najčastejšie sa na takúto reakciu používa agarový gél.
Po udaní parametrov sa v r.podmienok, za ktorých môžu molekuly navzájom difundovať, ich stretnutie bude sprevádzané tvorbou komplexu antigén + protilátka. Takýto novotvar je schopný difundovať v samotnom géli a vyzráža sa vo forme prúžku, ktorý možno zistiť voľným okom. Ak sú antigén a protilátka homológne, nevytvorí sa žiadny pás.
Vytvorenie podmienok, za ktorých bude difúzia prebiehať v agarovej vrstve, zahŕňa naliatie zložiek, ale celkový počet jamiek a ich relatívnu polohu určuje rozhoduje typ úlohy, ktorá je potrebná. RPD dáva osobe schopnosť odhaliť a identifikovať neznáme izolované vírusy testovaním pomocou známych protilátkových sér.
Aplikácia
Zrážky majú široké využitie nielen pri diagnostike chorôb, ale svoje uplatnenie nachádzajú aj pri súdnolekárskom skúmaní. Je ťažké si predstaviť analýzu, v ktorej je možné určiť druh krvi, časť orgánu alebo tkaniva nájdené na zločineckej zbrani, ktorá nevyužíva zrážaciu reakciu. Pri tomto procese sa používajú zrážacie séra, ktoré sa získavajú imunizáciou rôznych zvierat a vtákov. Je dôležité, aby hladina titra v sére nebola nižšia ako 1:10 000 a tiež musí mať dostatočnú špecifickosť. Z zistenej škvrny krvi alebo jej kôry sa robí extrakt na fyzikálne. riešenie, ktoré bude ďalej vystavenézrážacie sérum. Podľa tejto reakcie je možné stanoviť typy tkanivových a orgánových proteínov ľudí aj zvierat. Získanie zakalených extraktov núti človeka uchýliť sa k vyzrážaniu na agare.
Závery
Analýzou prečítaných informácií môžeme konštatovať, že zrážacie reakcie sú pre človeka mimoriadne dôležité, pretože umožňujú diagnostikovať rôzne antigény pomocou protilátok, tento jav je tiež široko používaný pri súdnom lekárskom vyšetrení a umožňuje identifikovať typ krvi, tkaniva alebo orgánu podľa vzťahu ku konkrétnemu subjektu. Existuje niekoľko typov a metód zrážok, ktoré sa používajú v súlade s novými potrebami riešeného problému.
