Moderná medicína má špecifické diagnostické metódy, ktoré umožňujú stanoviť etiológiu chorôb u ľudí na základe definície patogénu, geneticky cudzích látok stimulujúcich imunitnú odpoveď, nukleových kyselín, ako aj alergických a imunitných zmien ku ktorým dochádza v dôsledku jeho konania. Dnes sa RIA široko používa v imunológii a virológii, to znamená v rádioimunoanalýze, o cieľoch nastavenia, komponentoch, priebehu, ktorých účtovanie sa budeme zaoberať v tomto článku. Tento test je schopný detekovať antigény ako výsledok ich interakcie s protilátkami.
Definícia
RIA je metóda diagnostiky biologicky aktívnych látok v kvapalinách, ktorá je založená na reakcii antigénov s protilátkami pri použití rádionuklidom značených analógových látok, ktoré majú špeciálne väzbové systémy. Po ich interakciivzniká imunitný komplex, ktorý sa oddelí a študuje sa jeho rádioaktivita. Je známe, že rádioimunoanalýza sa vykonáva pomocou štandardných reagenčných súprav.
Každé činidlo je schopné určiť koncentráciu jednej špecifickej látky. Biologická tekutina odobratá človeku sa zmieša s činidlom, po inkubačnej dobe sa oddelia voľné a naviazané rádioaktívne látky, potom sa vykoná rádiometria a vypočítajú sa výsledky. Na označenie látok sa používa izotop jódu. Je označený a pridaný v určitom množstve.
Aplikácia
Rádioimunitná analýza má široké uplatnenie v medicíne a mikrobiológii. Používa sa na diagnostiku chorôb srdca a ciev, chorôb endokrinných a iných systémov tela. RIA sa tiež často používajú na identifikáciu príčiny neplodnosti, patológie vývoja plodu. V onkológii sa táto analýza vykonáva s cieľom určiť markery novotvarov, aby bolo možné monitorovať účinnosť liečby. V imunológii sa RIA používa na štúdium prítomnosti imunoglobulínov, enzýmov, proteínov atď. v krvi. Dnes vám táto analýza umožňuje zistiť koncentráciu rôznych hormónov až do milióntiny gramu. Rádioimunitná analýza krvi je teda široko používaná v kardiológii, onkológii, endokrinológii, gynekológii a virológii.
Metódy RIA
V závislosti od povahy je obvyklé rozlišovať medzi niekoľkými metódami analýzyreakcie:
- Nekompetitívna metóda je charakterizovaná takými reakčnými zložkami, ako sú štandardné a detegovateľné antigény, tlmivý roztok, izotopom značené protilátky, určité protilátky, ktoré sa viažu na sorbent. K testovaným protilátkam sa pridá antigén. Po inkubácii sa objavia komplexy antigén-protilátka, sorbent sa premyje, pridajú sa značené protilátky, ktoré sa viažu na antigén v komplexe. Rádioaktivita závisí od koncentrácie testovaného antigénu.
- Konkurenčná rádioimunoanalýza je riadená konkurenciou antigénu. Tu sú také zložky reakcie, ako sú kontrolné a stanovené antigény, tlmivý roztok, určité protilátky, ktoré sa viažu na sorbent, ako aj izotopovo značený antigén. Diagnóza začína zavedením antigénu, ktorý sa vyšetruje. Na sorbente sa vytvorí komplex antigén-protilátka. Potom sa sorbent premyje a vstrekne sa značený antigén. Pritom sa viaže na protilátku. Pomocou počítadiel sa meria reakcia a množstvo rádioaktivity. Bude v nepriamom pomere k množstvu antigénu vo vzorke.
- Nepriama metóda je najbežnejšia. V tomto prípade má rádioimunoanalýza reakčnej zložky napríklad kontrolné a testovacie sérum, antigény alebo protilátky, ktoré sú naviazané na sorbente, protilátky značené izotopmi, tlmivé roztoky. Protilátky alebo antigény, ktoré sú diagnostikované, reagujú s antigénmi alebo protilátkami, ktoré sú naviazané na sorbent. Potom sa inkubát odstráni, vstreknú sa značené protilátky, ktoré sa naviažu nakomplexy antigén-protilátka.
Metodika analýzy
Rádioimunoanalýza sa teda vykonáva pomocou špeciálnych činidiel. Sady sú štandardné, takže akékoľvek chyby alebo porušenia nie sú povolené. Výsledky diagnostiky sú spoľahlivé. Analýza sa vykonáva ráno, preto odoberajú venóznu krv človeku. V laboratóriu sa z krvi oddelí sérum, ktoré sa použije na RIA. Toto sérum sa zmieša s činidlami. Výsledná zmes sa inkubuje pri danej teplote v termostate.
Vo výslednej zmesi sa oddelia voľné a viazané izotopy. Potom sa skontroluje prijatý materiál a vypočítajú sa výsledky. Mechanizmus rádioimunologického testu má niekoľko možností. Vyššie opísaná technika je RIA v kvapalnej fáze, pretože všetky zložky sú v kvapalnom stave. Existuje RIA a tuhá fáza, kde sú protilátky umiestnené v nosiči, ktorý sa nerozpúšťa v kvapaline.
Dostupnosť diagnostiky
Využitie tejto diagnostickej metódy v medicíne je každým rokom čoraz obľúbenejšie. V poslednej dobe sa rádioimunoanalýza stala štandardnou diagnostickou metódou, ktorú môže predpísať lekár pri stanovení konečnej diagnózy. Tento typ analýzy sa dlho uskutočňoval iba v laboratóriách, dnes sa stal bežnou výskumnou metódou. Ale RIA vyžaduje použitie drahého zariadenia (gama počítadlá) a reagenčné súpravy majú krátku životnosť. To všetko je hlavnou nevýhodou takejto analýzy, ktorá ju určujedrahé náklady.
Navyše RIA nedávno začala nahrádzať modernejšie metódy výskumu, ktoré nevyžadujú interakciu s izotopmi. Medzi ne patrí enzýmová imunoanalýza. Preto je RIA žiaduca na mnohých klinikách. Dlho sa používa vo veľkých mestách a diagnostických centrách, ale v bežných nemocniciach v malých mestách sa táto analýza prakticky nepoužíva kvôli jej vysokej cene.
Dôstojnosť RIA
Rádioimunoanalýza má mnoho výhod. Je dosť špecifický a má vysokú citlivosť, čo umožňuje určiť prítomnosť biologicky aktívnych látok v neuveriteľne malých množstvách. Táto analýza sa vykonáva veľmi jednoducho, od osoby sa vyžaduje iba darovanie žilovej krvi. Výsledky testov sú 100% presné a pripravené hneď na druhý deň. RIA možno tiež ľahko automatizovať. Táto analýza vám teda umožňuje identifikovať proteíny, ktoré sú odpadovými produktmi infekčných baktérií, čo naznačuje prítomnosť infekcie v tele.
Diagnostika vo virológii
Najsľubnejšia RIA je pre virológiu, pretože vám umožňuje rýchlo identifikovať vírusové patogény. Je to spôsobené tým, že v posledných rokoch narastá výskyt rôznych infekcií, ktoré sa šíria veľkou rýchlosťou a spôsobujú úmrtnosť ľudí. To platí najmä pre krajiny, ktoré nemajú vysokésociálny a ekonomický rozvoj (krajiny Ďalekého východu), rádioimunoanalýza je tu jednoducho nevyhnutná. Mikrobiológia využíva túto diagnostickú metódu aj na zisťovanie infekčných ochorení spôsobených patogénnymi baktériami. Napríklad RIA sa široko používa na detekciu brušného týfusu. V prvých dňoch ochorenia, pred vymenovaním liečby, je potrebné vykonať štúdiu výkalov a zvracania. Výsledky diagnostiky sa však získajú až po dlhom čase. Tu RIA prichádza na záchranu, analýza vám umožňuje identifikovať pôvodcu choroby v krátkom čase. Človek daruje krv, na druhý deň sú výsledky štúdie hotové. Táto analýza pomáha pri stanovení presnej diagnózy.
Results
Rádioimunoanalýza je v súčasnosti jednou z najcitlivejších diagnostických metód. Používa sa na analýzu akejkoľvek látky, proti ktorej možno získať protilátky. Táto metóda umožňuje urobiť veľa vzoriek v najmenšom objeme skúmanej kvapaliny, ako aj zaznamenať výsledky v čo najkratšom čase, pretože ju možno plne automatizovať. Túto analýzu vyvinul v 50-tych rokoch Solomon Burson. O tridsať rokov neskôr sa rozšírila. K dnešnému dňu neexistuje stopercentná alternatíva k RIA, pretože analýza má vysokú citlivosť. RIA sa používa v rôznych odvetviach medicíny, ako aj v mikrobiológii a virológii.
Nakoniec
Použitie metódy vo virológii je dnes veľmi relevantné, pretože dávaschopnosť vyšetriť šírenie infekcií, stanoviť presnú diagnózu a predpísať špecifickú liečbu. Tento problém sa týka najmä krajín, ktoré majú nízku úroveň hospodárstva a sociálneho rozvoja. Táto analýza vám tiež umožňuje zistiť množstvo hormónov a enzýmov v ľudskom tele. Aby výskumník získal spoľahlivé výsledky, potrebuje iba darovať krv na analýzu. Medicína nestojí na mieste, spolu s rádioimunoanalýzou sa objavujú nové výskumné metódy, ale RIA je naďalej jedným z lídrov v lekárskej diagnostike.
