Rozmanitosť bakteriálnych infekcií si vyžaduje jasnú identifikáciu patogénu a definíciu jeho druhu. Na určenie typu mikroorganizmu pomáhajú mikrobiológom jeho farbiace vlastnosti - náchylnosť mikróbu na farbenie rôznymi farbivami. Táto metóda vám umožňuje preskúmať morfológiu patogénu. Farbiace vlastnosti baktérií majú veľký význam pre praktický a teoretický výskum v oblasti mikrobiológie.
Mikrobiálny výskum
V bakteriológii existuje veľa metód na farbenie mikroorganizmov. Všetky sú založené na farbiacich vlastnostiach baktérií. Farbenie umožňuje určiť ich tvar, štruktúru, veľkosť, relatívnu polohu. To umožňuje riešiť problémy systematizácie typov mikroorganizmov všeobecnej biológie a porovnávacej mikrobiológie.
Prečo ich maľovať
Baktérie sú praktickytransparentné organizmy a bez použitia farbenia sú pre konvenčnú mikroskopiu zle viditeľné. Na štúdium predmetov môžete použiť špeciálne typy mikroskopie (fázový kontrast, tmavé pole), ale najjednoduchším spôsobom je farbenie, po ktorom sa baktérie stanú viditeľnými v bežnom svetelnom mikroskope.
Príprava vzorky
Bez ohľadu na použitú techniku farbenia existujú jednotné pravidlá pre prípravu skúmaného objektu. Nasledujúce fázy sú povinné:
- Sterilné nástroje vytvárajú šmuhu na podložnom skle.
- Vzorka sa suší. Toto sa vykonáva pri izbovej teplote alebo pomocou sušiacich skríň.
- Nasleduje fáza fixácie - mikroorganizmy sú na sklo pripevnené špeciálnymi zlúčeninami.
- Správne zafarbenie – vzorka je na určitú dobu pokrytá farbivom a potom sa zmyje.
- Konečné sušenie – vzorka sa znovu suší.
Najbežnejšie farbivá
Najbežnejšie používané farbivá sú na báze anilínu s rôznymi hodnotami kyslosti (pH). Väčšina farbív sú prášky, ktoré sa riedia v alkohole.
Farbivá, v ktorých sú katióny ako farbivá, sa nazývajú zásadité (pH vyššie ako 7). Môžu byť použité na farbenie mikroorganizmov v červenej (purpurová, safranín), fialovej (metylfialová, tionín), modrej (metylénová modrá), zelenej (malachitová zelená), hnedej (chrysoidín) a čiernej (indulín) farbách.
Farbivá, v ktorých sú farbivami anióny, sa nazývajú kyslé (pH menej ako 7). Vzorku zafarbia červenou (eozín), žltou (pikrín) alebo čiernou (nigrozín).
Existuje skupina neutrálnych farbív (napríklad rodamín B), kde katióny aj anióny pôsobia ako farbivá.
Mŕtva alebo živá kultúra
Metódy farbenia sú rozdelené do dvoch skupín podľa formy života testovanej vzorky.
- Vitálne (celoživotné) zafarbenie. Táto metóda štúdia vlastností mikroorganizmov sa používa pri štúdiu živých tkanív, čo umožňuje pozorovať životne dôležité procesy mikróbov. Na toto farbenie sa používajú farbivá s nízkou toxicitou a vysokou penetračnou silou.
- Postvitálne zafarbenie. Ide o farbenie mŕtvych alebo usmrtených mikroorganizmov. Vďaka farbiacim vlastnostiam baktérií mikrobiológovia určujú ich štruktúru. Práve toto farbenie je najpoužívanejšie.
Grampozitívne a gramnegatívne
Práve tieto vlastnosti baktérií možno nájsť v návodoch na rôzne lieky. Táto metóda štúdia farbiacich vlastností baktérií je založená na použití farbiva genciánová violeť a fixácii jódu. Toto je technika Hansa Christiana Grama, dánskeho lekára, ktorý ju navrhol v roku 1884. V dôsledku tohto zafarbenia sú baktérie rozdelené do dvoch skupín:
- Gram (+) – zmení sa na modrú(stafylokoky a streptokoky).
- Gram (-) - škvrna ružová až červená (enterobaktérie, salmonela, E. coli).
Rôzne výsledky farbenia sú spôsobené rôznymi farbiacimi vlastnosťami bakteriálnych stien. Metóda Gramovho farbenia je stále hlavnou metódou v diagnostike niektorých infekčných chorôb.
Iné techniky farbenia
Poďme charakterizovať niekoľko ďalších metód široko používaných v bakteriológii.
- Ziehl-Nelsonova metóda – určuje odolnosť baktérií voči kyselinám. Identifikuje pôvodcov tuberkulózy a mykobakteriózy.
- Romanovského-Giemsova technika - farbí acidofilné (kyselina octová a kyselina mliečna) baktérie na červeno a bazofilné (spirochéty a prvoky) na modro.
- Morozovova technika – zafarbí baktérie do hneda a zviditeľní ich bičíky.
Je možné vidieť spóry
Fuchcínové farbenie Tsiel vám umožňuje vidieť spóry baktérií. Po zafarbení majú ružovú farbu a sú jasne viditeľné na pozadí modrých baktérií. Táto metóda je tiež nástrojom bakteriológie a má veľký praktický význam.
